Proteaz Enziminin Bacıllus Subtılıs Megatherium Ve Bacıllus Polymxa Bakteri Türlerinden Kısmi Saflaştırılması Ve Özelliklerinin İncelenmesi

Abstract

Bu çalışmada, proteaz enzimi Bacillus subtilis megatherium ve Bacillus polymxa bakteri türlerinden kısmi olarak saflaştırılmış ve bazı özellikleri incelenmiştir. Enzim ilk olarak çeşitli üreme ve sporlanma koşullarında üretilmiştir. Saflaştırma aşamaları olarak amonyum sülfat ile doyurma, diyaliz ve DEAE-Sefaroz iyon değiştirme kromatografisi uygulanmıştır. Bacillus subtilis megatherium türü için yapılan saflaştırma işlemlerinde %80 doyurma sonrası çözelti kısmına göre 1.3 kat saflaştırma sağlanmıştır. Bacillus polymxa türü için çalışmalarda, %80 doyurma sonrası ham homojenata göre 5 kat, iyon değiştirme kromatografisi sonrası ham homojenata göre yaklaşık 10 kat saflaştırma gerçekleştirilmiştir. Çalışmalarda ayrıca Bacillus subtilis megatherium ve Bacillus Polymxa türünden elde edilen proteaz enziminin optimum pH, optimum sıcaklık, pH kararlılığı, sıcaklık kararlılığı gibi özellikleri; aktivite üzerine aktivatör ve inhibitör etkisi, reaksiyon süresi ve substrat etkisi incelenmiş ve molekül ağırlığı tayini yapılmıştır.

Protease enzyme from Bacillus subtilis megatherium and Bacillus polymxa which are the sources of bacteria, was purified and determined its characteristics. Firstly, protease enzyme was producted in the growth and sporulation conditions. The protease was purified in a procedure involving ammonium sulphate precipitation, DEAE-Sepharose ionic exchange chromatography. In the study of purification from Bacillus subtilis megatherium species, the purification fold is 1.3 after 80% ammonium sulphate fraction. In the study of purification from Bacillus polymxa species, the purification fold is 5 after 80% ammonium sulphate fraction and the purification fold is 10 after DEAE-Sepharose ionic exchange chromatography. Some parameters of the partially purified protease enzyme obtained from Bacillus subtilis megatherium and Bacillus polymxa bacteria species. These are optimum temperature, temperature stability, optimum pH , pH stability, molecular weight, effects of reaction time and substrate concentration on enzyme activity.