Tatlı Patatesten Asit Fosfataz Enziminin Kısmi Saflaştırılması Ve Kinetik Özelliklerinin İncelenmesi

Abstract

Enzimler yüksek seçicilik ve reaktiviteye sahip biyokimyasal katalizörlerdir. Bir ortofosforik monoester hidrolaz olan (enzim sınıflandırmasında EC 3.1.3.2) asit fosfataz çeşitli ortofosfat esterlerin hidrolizini ve transfosforilasyon reaksiyonlarını katalizleyen bir enzimdir. Yapılan bu çalışmada tatlı patatesten asit fosfatazın kısmi saflaştırma çalışmaları yapılmış ve kinetik özellikleri incelenmiştir. Tatlı patatesin inert komponentleri santrifüjleme ile çöktürülerek, amonyum sülfat ile fraksiyonlama, diyaliz, iyon değiştirici kromatografi işlemleri ile kısmi olarak saflaştırma çalışmaları yapılmıştır. Ayrıca pH, sıcaklık, substrat konsantrasyonu ve inkübasyon zamanı değişimi çalışmaları ile enzim için optimum değerlerin belirlenmesine çalışılmıştır. Elde edilen asit fosfataz enziminin spesifik aktivitesi incelendiğinde patates ile yapılan iyon değiştirici kolondan geçirme işlemi ile 24 kat saflaştırma yapılmıştır.

Enzymes are biochemical catalysts with extraordinary specificity and reactivity. Acid phosphatases which are orthophosphoric monoester hydrolases (enzyme classification EC 3.1.3.2) are enzymes which catalyse the hydrolisis and transphosphorilation reactions of many different orto phosphate esters. In this study the isolation and partial purification processes of sweet potato are performed and its kinetic properties are examined. For the partial purification, the inert components of sweet potato were precipitated via centrifugation, purified via ammonium sulphate fractionation, dialysis and ion exchange chromatography. And by changing the pH, temperature, substrate concentration and incubation time, the optimum values of these criteria were determined for the acid phosphatase enzyme obtained from sweet potato. When the specific activity of the acid phosphatase enzyme obtained from sweet potato after the purification wia ion exchange chromatography, a 24 fold purification was obtained.