Bacillus Subtilis’ De Sporlanma Süresince Yvgw’ Nun Fonksiyonel Rolü

Abstract

yvgW ekspresyonun sporlanmanın geç evresinde gerçekleşmesi ışığı altında, yvgW geninin spor öncesi-spesifik σG sigma faktörüne ekspresyon için bağımlılığı transkripsiyonel yvgW::lacZ füzyon ve fazladan spoIIIG lokusunda delesyon olan, σG’yi kodladığı bilinen yeni bir mutant türün yaratılması ile incelenmiştir. Yapılmış olan bu çalışma, B.subtilis’te yvgW geninin sporlanma sürecinde işlevsel rolünün aydınlatılması ve moleküler karakterizasyonunun başarılması için yapılan deneysel araştırmaları içermektedir. Sırasıyla, F, E, K ve B sigma faktörlerini kodlayan spoIIAC, spoIVCB, spoIVCB ve sigB genlerinin silinmelerinin yvgW-lacZ geninin ekspresyonuna etkisi araştırılmıştır. Ayrıca, yvgW::spc oluşturulması ile, yvgW mutantının sıcaklık, kloroform ve lizozime karşı dirençleri incelenmiştir. yvgW sporlarında DPA düzeyleri de incelenmiş ve yaban birey ile karşılaştırılmıştır. Delesyon mutantı ve yaban bireyin gösterdikleri beslenmeye bağlı özel çimlenme ve fazla büyüme özellikleri analizleri, yvgW geninin sporlanma sürecindeki işlevsel rolünü anlamada daha fazla bilgi sahibi olunması için gerçekleştirilmiştir.

Under the light of the fact that, the timing of yvgW expression corresponds to the late sporulation stage, the dependence of yvgW expression on forespore-specific sigma factor G was previously examined through construction of a new mutant strain containing transcriptional yvgW::lacZ fusion and an additional deletion on spoIIIG locus that is known to encode G. Present research includes the studies to achieve molecular characterization and elucidation of the functional role of yvgW gene in sporulation process in Bacillus subtilis. Effects of the deletion of spoIIAC, spoIVCB, spoIVCB and sigB genes, encoding for F, E, K and B, respectively, on the expression of yvgW-lacZ were investigated. Moreover, through the construction of yvgW::spc, yvgW, mutant cells were investigated for their spore properties, such as their resistance profiles against heat chloroform and lysozyme. The level of dipicolinic acid was also investigated in yvgW spores and compared to wild type spores. Furthermore, analysis of the nutrition specific germination and outgrowth characteristics of null mutant and wild type cells was performed in order to gain more insights about the functional role of yvgW gene during sporulation.