FBE- Moleküler Biyoloji-Genetik ve Biyoteknoloji Lisansüstü Programı - Yüksek Lisans
Bu koleksiyon için kalıcı URI
Gözat
Yazar "Arslan, Ezgi" ile FBE- Moleküler Biyoloji-Genetik ve Biyoteknoloji Lisansüstü Programı - Yüksek Lisans'a göz atma
Sayfa başına sonuç
Sıralama Seçenekleri
-
ÖgeYvfı Mutant Sporları Karakterizasyonu(Fen Bilimleri Enstitüsü, 2010-09-02) Arslan, Ezgi ; Yazgan Karataş, Ayten ; Moleküler Biyoloji-Genetik ve Biyoteknoloji ; Molecular Biology and GeneticsBacillus subtilis de sporulasyon, besin yetersizliği gibi olumsuz koşullara yanıt olarak, bakteri metabolizmasının gelişim aşamasında meydana gelen farklılaşmadır. Bu süreç, hücre dışı ve hücre içi sinyallere bağlı olarak, farklı gen ürünlerini ve faktörlerini harekete geçirecek bir düzenleyici sistem içerir. Ayrıca, bu sıradışı olan gelişimsel aşama farklılaşmada rol oyanayan bir çok gen arasındaki ardışık ve karmaşık etkileşimlerden oluşur. Sporulasyonun tamamlanması üzerine eğer koşullar büyüme için tekrar elverişli hale gelirse, olgunlaşmış spor çimlenir ve çimlenme sonrası büyüme evresi olan outgrowth aşamasına geçer. Ayrıca, sporun yapısı ve kimyasal bileşimi spor direnci ve çimlenme profilinde önemli bir rol oynamaktadır. Spora dirençliliğini sağlamada büyük role sahip üç önemli molekül vardır. Bu moleküller küçük asitte çözülebilen proteinler (SASPs), spor ceket proteinleri ve dipiklonik asittir (DPA). SASP’ ler sadece ısıya, çeşitli kimyasallara UV radyasyonuna karşı spora dirençlilik sağlamada önemli unsur olmayıp aynı zamanda çimlenme sırasında protein sentezi için amino asit sağlarlar. Dahası, spor ceketi bazı kimyasallara, spor korteksinin yıkımını sağlayan egzojen litik enzimlere ve saldırgan protozoalara karşı dirençlilik sağlar. Bunlara ek olarak, spor çekirdeğindeki DPA birikimi sporulasyonda spor çekirdeğindeki suyun azalmazından sorumlu olup aynı zamanda spor DNA’sının UV fotokimyasında önemli bir rol oynamaktadır. Sporlanmaya spesifik genlerin çeşitli antibiyotiklerle etkileşime girdiğine ilişkin raporlar sonucunda antibiyotiklerin sporlanmayla ilgili fonksiyonlarının olduğu hipotezi güçlenmiştir. Önceki çalışmalarda 125 kDa ağırlığında küçük bir dipeptid antibiyotik olan basilisinin sporlanmada kontrol elementi olabileceği gösterilmiştir. Ayrıca, son zamanlarda Bacillus subtilis de yvfI geninin basilisin biyosentezinde gerekli olduğu iddia edilmektedir. Yukarıda belirtilen sporulasyon ve yvfI geni arasındaki olası ilişkiyi ileri süren bulguların ışığı altında, mevcut projenin amacı yvfI geni ürününün olası etki bölegerinin sporulasyon süreci sırasında incelemektir. Bu amaçla, bu çalışmada yabani tip PY79 ve onun basilisin defektif türevi TEK1 (yvfI::Tn10::spc) sporlarının temel spor özellikleri karşılaştırıldı. Dirençlilik profillerini karşılaştırmak amacıyla, hem mutant suş hem yabanil suş sporları lizozim, ısı, hidrojen peroksit ve kloroforma maruz bırakıldı. Bunu takiben, SASP ve spor ceketi proteinleri, hem yabanil suş PY79’dan hem basilisin defektif suş TEK1’den izole edilmiştir. SASPs analizinde, üç ana bant olarak görüntülenen α, β, γ-tipi SASP’ lerin, düşük pH’ lı poliakrilamit jel elektroforezi kullanılarak her iki suşta da eksprese edildikleri gözlemlenmiştir. Diğer yandan PY79 sporları, TEK1 sporlarından az sayıda spor ceketi proteiniyle ayrılır. TEK1 ve PY79 sporlarının çimlenme ve outgrowth karakteristikleri incelenmiştir ve bu sayede yvfI geninin sporlanmada fonksiyonu detaylı gözlemlenmiştir. Sonuçlar göstermiştir ki, TEK1 ve PY79 sporları yalnızca zengin besiyeri olan 2x YT’ de değil aynı zamanda SMM fakir besiyerinde de çimlenme ve outgrowth profili göstermiştir. DPA seviyeleri yukarıda belirtilen suşlarda karşılaştırılmış. Son olarak, Bacillus subtilis ‘de sporulasyon sürecinde yvfI gen ürününün fonksiyonel rolünü incelemek amacıyla PY79 ve TEK1 sporlarının DSM agarda koloni morfolojisi incelenmiştir