FBE- Moleküler Biyoloji-Genetik ve Biyoteknoloji Lisansüstü Programı - Yüksek Lisans

Bu koleksiyon için kalıcı URI

http://hdl.handle.net/11527/181

Gözat

Yazar "Akçe, Hande" ile FBE- Moleküler Biyoloji-Genetik ve Biyoteknoloji Lisansüstü Programı - Yüksek Lisans'a göz atma
  • Öge
    Pyrococcus Horıkoshıı Putatif Glutamat Sentaz Küçük Altünite Homologlarının Heterelog Expresyonu
    (Fen Bilimleri Enstitüsü, ) Akçe, Hande ; Dinçtürk, Benan ; Moleküler Biyoloji-Genetik ve Biyoteknoloji ; Molecular Biology and Genetics
    Glutamat sentaz (GOGAT), bakteri, alg ve bitkilerde amonyak asimilasyonun ilk basamaklarında görev alan ve glutaminin amido azotunun 2-okzoglutarata transamidasyonu sonucu iki molekül glutamat oluşumunu katalizleyen önemli bir enzimdir. GOGAT tarafından kullanılan amonyak, bitkilerde fotorespirasyon, amino acid yıkımı gibi metabolik işlemler sonucu sağlanabildiği gibi, nitrat ve atmosferik diazot gibi dış azot kaynaklarının indirgenmesi yoluyla da sağlanabilir. Pyrococcus cinsinden olan P. horikoshii, P. furiosus ve P. abyssi’nin genomlarında, glutamat sentazın küçük altünitesine benzerlik gösteren iki tane homolog bölge vardır. Bununla beraber P. horikoshii ve P. abysii’nin genomlarında, enzimin glutamat oluşumundan sorumlu olan büyük altünitesini kodlayan bir bölge bulunmamaktadır. İki tane putatif glutamat sentaz küçük altünite homoloğunun varlığı, gen duplikasyonu olasılığını düşündürmektedir. Glutamat sentazın evriminin, lateral gen transferi ve iki altünitenin yüksek yapılı canlılarda birleşmesi olaylarını kapsaması muhtemeldir. Bunlar ışığında, bu homolog bölgelerin, elektron transfer protein domeynlerinin arkealarda bulunan erken formları olabilecekleri ve daha sonradan evrim sürecinde elektron transfer enzimlerin yapısına katılmış olabilecekleri düşünülebilir. Bu çalışmada, bu hipotezin gerçekliğini araştırmak için, Pyrococcus horikoshii’ nin iki putatif glutamat sentaz küçük altünitesi homoloğu, PH0876 ve PH1873, klonlanmış ve Escherichia coli’de protein ekpresyonu gerçekleştirilmiştir. Elde edilen sonuç Western Blot analizi ile desteklenmiştir. Üretilen proteinler, HisTag füzyon proteini olmalarından faydalanılarak saflaştırılmıştır. Buna ek olarak, aktivite analizlerinde kontrol amaçlı kullanılacak olan Medicago sativa’ya ait NADH-bağımlı glumat sentazın, küçük altünite ile benzerlik gösteren bölgesi de ekpresyon vektörüne klonlanmış ve Escherichia coli’de protein ekpresyonu gerçekleştirilmiştir.