Corıolopsıs Polyzona Tarafından Üretilen Lakkaz Enziminin Saflaştırılması Ve Karakterizasyonu

dc.contributor.advisor Bermek, Hakan tr_TR
dc.contributor.author Hüner, Pınar tr_TR
dc.contributor.department Moleküler Biyoloji-Genetik ve Biyoteknoloji tr_TR
dc.contributor.department Molecular Biology and Genetics en_US
dc.date 2007 tr_TR
dc.date.accessioned 2015-06-15T19:10:29Z
dc.date.available 2015-06-15T19:10:29Z
dc.description Tez (Yüksek Lisans) -- İstanbul Teknik Üniversitesi, Fen Bilimleri Enstitüsü, 2007 tr_TR
dc.description Thesis (M.Sc.) -- İstanbul Technical University, Institute of Science and Technology, 2007 en_US
dc.description.abstract Lakkazlar birden fazla bakır taşıyan oksidaz ailesinin içinde yer almakta ve mavi bakır içeren proteinler arasında en yaygın olarak bulunmaktadır. Polimerik lignin, aromatik amin ve benzentiyol gibi birçok bileşiğin yükseltgenmesini katalizlerler. Lakkaz enzimleri tarafından gerçekleştirilen fenolik bileşiklerin yükseltgenmesi ve moleküler oksijenin suya indirgenmesi reaksiyonları bu enzimin yoğun olarak çalışılmasını sağlamıştır. Lakkazlar yüksek bitkiler, bakteriler ve mantarlar tarafından üretilmektedir. Mantarlar tarafından üretilen lakkazların kağıt hamuru endüstrisi, tekstil boyalarının renksizleştirilmesi ve zehirinin giderimi, atık zehirlerinin giderimi ve biyolojik arıtma gibi birçok alanda uygulamaları bulunmaktadır. Mantarlar arasında beyaz çürükçül küf mantarları lakkazların en önemli üreticileridir. Bu çalışmada, beyaz çürükçül küf mantarı olan Coriolopsis polyzona MUCL 38443 lakkaz üretimi için yetiştirilmiştir. 50g/l glikoz, 17 g/l bakteriyolojik pepton, 2.5 g/l KH2PO4, 1.027 g/l MgSO4.7H2O, 0.03127 g/l CuSO4.5H2O, 0.0559 g/l MnSO4.H2O, 10 mg/l Tiamin–HCl içeren besiyeri C. polyzona’ dan yüksek miktarlarda lakkaz üretimini sağlamıştır. Enzim aktivitesi en yüksek değerine ulaştığında, organizma uzaklaştırılmış ve enzimi içeren sıvı ultrafiltrasyon tekniği ile homojen bir hale getirilmiştir. Saflaştırma protokolü iki farklı kolonun kullanıldığı anyon değişim kromatografisi ile hidrofobik etkileşim kromatografisinden oluşmaktadır. Lakkazın moleküler ağırlığı SDS-PAGE analizi ile hesaplanmış olup, aktivite tayini Native-PAGE analizi ile belirlenmiştir. Saflaştırılan lakkaz enzim aktivitesi üzerinde pH, sıcaklık, substrat ve inhibitor maddelerin etkileri incelenmiştir. Ayrıca saflaştırılmış lakkaz enziminin kinetik özellikleri, dalga boyu ve N-bölgesinde yer alan aminoasitlerin tayini yapılmıştır. tr_TR
dc.description.abstract Laccases are included in multicopper oxidase family and the mostly distributed of all the blue copper-containing proteins. They catalyze the oxidation of a wide variety of compounds including polymeric lignin, aromatic amines, benzenthiols. Oxidation of phenolic compounds and reduction of molecular oxygen to water by laccases have led to intensive study of them. Laccases are produced by a wide range of higher plants, bacteria and fungi. Fungal laccases have a large variety of applications, such as pulp delignification, textile dye decolorization-detoxification, effluent detoxification, and bioremediation. Among fungi, white-rot fungi are the most important producers of laccases. In this study, white-rot fungus Coriolopsis polyzona MUCL 38443 was cultured for laccase production. A medium containing 50g/l glucose, 17 g/l bacteriological peptone, 2.5 g/l KH2PO4, 1.027 g/l MgSO4.7H2O, 0.03127 g/l CuSO4.5H2O, 0.0559 g/l MnSO4.H2O, 10 mg/l Thiamine–HCl supported high levels of laccase production by C. polyzona. When the enzyme activity reached to a maximum value, fungal mycelia were removed and the supernatant was purified to homogeneity by ultrafiltration. The purification protocol consisted of anion exchange chromatography with two different columns and hydrophobic interaction chromatography. The molecular weight of laccase was estimated by SDS-PAGE analysis and activity staining was determined by Native-PAGE analysis. Effects of pH, temperature, substrates and inhibitors on the activity of the purified laccase were further studied. Kinetic properties, spectrum analysis, and N-terminal aminoacid sequences were done for the purified enzyme. en_US
dc.description.degree Yüksek Lisans en_US
dc.description.degree M.Sc. tr_TR
dc.identifier.uri http://hdl.handle.net/11527/5366
dc.publisher Fen Bilimleri Enstitüsü tr_TR
dc.publisher Institute of Science and Technology en_US
dc.rights İTÜ tezleri telif hakkı ile korunmaktadır. Bunlar, bu kaynak üzerinden herhangi bir amaçla görüntülenebilir, ancak yazılı izin alınmadan herhangi bir biçimde yeniden oluşturulması veya dağıtılması yasaklanmıştır. tr_TR
dc.rights İTÜ theses are protected by copyright. They may be viewed from this source for any purpose, but reproduction or distribution in any format is prohibited without written permission. en_US
dc.subject Lakkaz tr_TR
dc.subject Beyaz çürükçül küf mantarları tr_TR
dc.subject Protein saflaştırma tr_TR
dc.subject Karakterizasyon tr_TR
dc.subject Kromatografi tr_TR
dc.subject Laccase en_US
dc.subject White-rot fungus en_US
dc.subject Protein purification en_US
dc.subject Characterization en_US
dc.subject Chromatography en_US
dc.title Corıolopsıs Polyzona Tarafından Üretilen Lakkaz Enziminin Saflaştırılması Ve Karakterizasyonu tr_TR
dc.title.alternative Purification And Characterization Of Laccase From Coriolopsis Polyzona en_US
dc.type Thesis en_US
dc.type Tez tr_TR
Dosyalar
Orijinal seri
Şimdi gösteriliyor 1 - 1 / 1
thumbnail.default.alt
Ad:
7041.pdf
Boyut:
912.52 KB
Format:
Adobe Portable Document Format
Açıklama
Lisanslı seri
Şimdi gösteriliyor 1 - 1 / 1
thumbnail.default.placeholder
Ad:
license.txt
Boyut:
3.16 KB
Format:
Plain Text
Açıklama