Please use this identifier to cite or link to this item: http://hdl.handle.net/11527/5412
Title: Heterologous Expressıon Of An Isoenzyme Of Pycnoporus Sanguıneus Laccase In Yeast Saccharomyces Cerevısıae
Other Titles: Heterologous Expression Of An Isoenzyme Of Pycnoporus Sanguineus Laccase In Yeast Saccharomyces Cerevisiae
Authors: Tamerler, Candan
Varışlı, Esra
Moleküler Biyoloji-Genetik ve Biyoteknoloji
Molecular Biology and Genetics
Keywords: lakkaz
heterolog ekspresyon
Pycnoporus sanguineus
laccase
heterologous expression Pycnoporus sanguineus
Issue Date: 11-Feb-2010
Publisher: Fen Bilimleri Enstitüsü
Institute of Science and Technology
Abstract: Yapılan çalışmada Pycnoporus sanguineus lakkaz-2 cDNA ’sının Saccharomyces cerevisiae mayasında heterolog ekspresyonu gerçekleştirilmiştir. Bu amaçla, ~1600 amino asitlik ve ~60 kDa moleküler ağırlığında olan matür bir lakkaz izoenzimini kodlayan, tam boyda bir lakkaz-2 (Lcc2) cDNA ’sı, bakırla indüklenebilen CUP1 promotörü taşıyan pSAL4 ekspresyon vektörüne klonlanmıştır. Rekombinant plazmid, lityum asetat protokolü kullanılarak S. cerevisiae W303-1A suşuna aktarılmış ve transformant koloniler 0.2 mM ABTS ve 0.6 mM CuSO4 içeren seçici besiyerinde substratı okside edebilme özelliklerine göre seçilmiştir. Pozitif transformant koloniler arasında yapılan tarama deneyleri ile en yüksek aktivite gösteren koloni seçilmiş ve sonrasında optimum ekspresyon koşullarının eldesi için karbon kaynağına ve bakır konsantrasyonlarına göre farklı besiyerilerinin etkileri tespit edilmiştir.
In this study, heterologous expression of Pycnoporus sanguineus laccase-2 cDNA in yeast Saccharomyces cerevisiae was performed. For this aim, a full length laccase-2 (Lcc2) cDNA, encodes for a mature laccase isoenzyme of ~1600 amino acid residues with a predicted molecular weight of ~60 kDa, was cloned into the pSAL4 expression vector which bear copper-inducible CUP1 promoter. Recombinant plasmid was transferred into the S. cerevisiae W303-1A strain via using lithium acetate protocol and transformed colonies were selected in terms of the properties of oxidizing the substrate in selective medium supplemented with 0.2 mM ABTS and 0.6 mM CuSO4. The colony which shows the highest activity was selected with screening assays between the positive transformant colonies, and then the effects of different media in terms of the carbon source and copper concentrations were determined for obtaining the optimum expression conditions.
Description: Tez (Yüksek Lisans) -- İstanbul Teknik Üniversitesi, Fen Bilimleri Enstitüsü, 2010
Thesis (M.Sc.) -- İstanbul Technical University, Institute of Science and Technology, 2010
URI: http://hdl.handle.net/11527/5412
Appears in Collections:Moleküler Biyoloji-Genetik ve Biyoteknoloji Lisansüstü Programı - Yüksek Lisans

Files in This Item:
File Description SizeFormat 
10114.pdf788.82 kBAdobe PDFView/Open


Items in DSpace are protected by copyright, with all rights reserved, unless otherwise indicated.